梦想农场

实验室无菌鼠养殖方案设计_无菌动物实验室

梦想农场 1

如何养殖竹鼠

竹鼠养殖基地《2010年竹鼠价格》:

实验室无菌鼠养殖方案设计_无菌动物实验室实验室无菌鼠养殖方案设计_无菌动物实验室


实验室无菌鼠养殖方案设计_无菌动物实验室


近段时间各地竹鼠行情有高有低,市场需求风平浪静,价格蹒跚举步。

竹鼠种鼠平均价格为420元/对(广西、贵州、云南、广东、湖南)各地价格异较大,广西较低竹鼠报价400元/对,贵州较高竹鼠报价700元/对;竹鼠肉鼠平均价格为45-65元/斤(全国),两广地区需求仍然旺盛。

舍的构造原理,竹鼠是一种生活在地底下的哺乳动物,地下的温度一年四季是恒温的,所以它的内室设计应该是冬暖夏凉。可根据地方的大小,整体调整构造。

一般是用硬度较强的砖来切墙,住宿投料一体形最为简单,就是一个四方格,长七十,宽三十五,高六十。或用楼房式长七十,宽三十五,高三十公分。层次叠放与人同高为宜,前面用钢铁做门,这样占地少。而且竹鼠会将粪便推出来,这样只打扫走廊就可以。当然也可以用砖砌成长70厘米,宽40厘米。高60厘米的水泥池,不过这样打扫卫生麻烦,供大家根椐自身条件进行选择。

竹鼠喜在安静、清洁、干燥、光线适当、空气新鲜的环境,以夜间活动较频繁。其活动规律可分活动周期和休息周期。其性喜暖,生活温度为-8--35℃,最适温度为8-28℃。喜躲于光线很弱的角落,若置于太阳下直晒时,就奔跑不息,显得不安。当人向它吹气时,立即露出锋利粗大的门齿,同时发出“呼呼--”的鸣声。

在人工饲养条件下,4-5个月龄,体重lkg以上开始性成熟,6个月龄后进行繁殖,一般年繁殖10只以上。幼鼠饲养3个月体重达0.5kg ,5个月可达1kg以上,的2-3kg。

圈舍

空房、地窖、防空洞均可养殖,或用砖砌成1.2X1.0x0.8m圈舍,用砖隔成两舍,间壁墙上留口,一间做内室,另一间做饲养场地。群养5对/平方米,也可笼养。

幼鼠

指离乳后3个月龄内的竹鼠。需投喂新鲜、易消化、富含营养成分的饲料。如胡萝卜、甘薯、竹笋。瓜皮等多汁饲料,以及玉米、麦麸、干馒头等精料。同时在日粮中添加鱼粉、骨粉、食盐、维生素、生长素,以提高饲料消化率,并促进幼鼠的生长发育。食物种类必须保持相对稳定,若有变更,应有过渡期。幼鼠日采食14-17g,每天投喂2次,上午少喂,下午多喂。根据幼鼠的体重、体质强弱分池饲养,每笼4-5只。体弱的应单独饲养,促进幼鼠体质恢复。

成年鼠

成年鼠抗病力强,生长发育快,体重1.2-1.5kg 。应定时定量投喂,早晚各1次,每只日投喂秸秆150-200g ,精料15-20g。基础日粮常年无需变更,若变更应有一个过渡期。成年鼠牙齿长得快,需要在笼内放置一根竹杆或硬木条供其磨牙。 每天检查竹鼠的粪便是否表面光滑,呈颗粒状,好像是用胶囊。注意其毛色是否光亮,活动是否活泼,如果有意外应及时处理。

种公鼠数量和质量与营养有关,但又不能喂的过肥。青粗饲料为竹叶、竹秆、竹笋、玉米秆、芦苇秆、甘蔗、胡萝卜等。配合日粮为:玉米粉55%、麸皮20%、花生麸15%、骨粉3%、鱼粉7%。

种鼠配种每日1-2次。春秋两季气温适宜,公鼠旺盛,品质好。每次1-3天,晚上配种。公、母配种比例为1:2-3,以1:l较好。

因幼鼠生长发育,成年母鼠还需养育幼仔,故幼鼠和成年母鼠日粮配方如下;①玉米55%、麸皮20%、花生麸15%、骨粉3%、鱼粉7%。另按总量加0.5%的食盐和生长素。②竹粉20%、面粉35%、玉米粉10%、豆饼粉13%、麦麸17%、鱼粉2%、骨粉2%、食盐0.2%、食糖0.8%。另外,在感冒每公斤饲料补叶酸1mg、烟酸20mg、氧化锌75mg、D-L蛋氨酸400mg、碘化钾0.5mg、硫酸锰60mg、VA1500IU、VD31500IU、VB12 20mg、VB2 6mg、VE30mg。将上述饲料混合,加水揉成馒头状或颗粒状,然后晒干或烘干,饲喂竹鼠。

母鼠怀孕期为60天,此期投喂饲料需干净、新鲜、多元化并保持相对稳定。母鼠怀孕后应单独饲养,经常保持舍内清洁,有干燥细软的垫草。分娩时间2-4小时,最快也要1-2小时分娩完毕。临产前6-7天,母鼠露出,活动减少,行动迟缓。临产前,不时发出“咕--咕--”声,分娩时,仔鼠连同胎衣和胎盘一并产出。

母鼠边产边把胎衣和胎盘吃掉,吃到咬断脐带,并敌净仔鼠身上的羊水。此时可听到仔鼠“叽--叽--”的叫声。母鼠产仔12小时后,开始给仔鼠哺乳。

分娩时避免观看和用手摸并保持环境安静,以防母鼠吃仔或弃仔。哺乳期也不能看母鼠巢穴,不能打扫卫生,不能往窝室内投喂饲料,窝室内卫生,母鼠自行会打扫。

哺乳期应投喂配合饲料并应适当加量,同时每天给予牛奶或豆浆,以增加母鼠的泌乳量。母鼠每天泌乳100g以上,足以满足仔鼠所需乳量。

房舍温度保持8-27℃,夏季气温超过30℃,又特别闷热时,要用电扇吹风和向池内淋水降温。冬季舍温不能低于5℃,保基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠是目前为止一个可以满足几乎所有基因组修饰要求的打靶技术,但目前只应用在小鼠的基因敲除上,而且其周期长工作量大。持在15 ℃左右。特别是季节变换时要防止贼风侵袭窝室。

仔鼠出生20-30天跟母鼠采食,此时喂鲜嫩易消化的竹枝、草茎、全价颗粒饲料。同时给母鼠补喂矿物质和各种维生素。40-50日龄后断奶分窝,分窝分工2-3批,每隔3-5天分1批。仔鼠成活率在98%以上。

疾病防治

饲养环境应定期用百毒杀、新洁尔消毒。饲料应新鲜多样化,不喂带水或霉烂食物。

胃肠炎

主要是投喂变质、发霉或饲料突变造成。

症状: 病鼠表现步态瞒珊,排出粪便呈黄绿色带血或白色粘胶陈样。

防治: 投喂新鲜饲料,口服土霉素0.5g,日服2次。

防治: ①肌肉注射安乃近0.2-0.5m1,每日1次。②肌肉注射复方氨基比林,每次1ml ,每日2 次。

口腔炎

咬伤、啃伤或敌食笼网、锐物引起。

症状: 不愿吃食,流涎,粘膜潮红发炎。重者精神萎靡,体温升高。

防治: ①用0.1 %水冲洗口或添加在饮水中让病鼠自饮并口服消炎片2片,也可用碘甘油涂擦口腔。 ②重症者可肌肉注射青霉素或链霉素20万单位,每日2次,3天为1 个疗程。

目前,竹鼠养殖形成一股热潮。一时间许多养殖场的种苗都供应不上。有许多新的养殖户开始担忧:现在的价格如此高,等到自己养殖成功了却一文不值了,该怎么办?

这种担忧也不是没有道理的,想当年也有类似的一种现象,就是养殖海狸,当时的一对海狸的种苗竞炒到4000元之高,结果养殖者大规模养殖之后却一钱不值了,现在想想都后怕啊。现在的竹鼠养殖会不会步之后尘呢?

肯定是不会的。这是因为:

一、竹鼠有丰富的营养价值,人们吃食竹鼠已经有一定的历史了,而且味道鲜美,深得人们的喜爱;

二、市场的价格稳中有升,现在的肉鼠一直保持在60元/斤,就算卖肉鼠,也大有市场;

三、养殖的成本不高,一只竹鼠从小到大的养殖成本在60元以下,就算养到3斤重,也能卖到180元。养殖者依然可以获得高额的利润;

由此种种的分析,竹鼠养殖前景看好,养殖者大可不必担忧。

谁能提供我实验小鼠饲料中各营养素比例

四、竹鼠的皮毛有很大的利用价值,有厂家专门收购,而且价格高昂。

由于所含营养物质的限制,单一的饲料原料无法全面满足动物的营养需求,这就应选取不同的饲料原料,按各种动物的营养要求及每种原料的营养物质含量互相搭配,使其所提供的各种营养素均符合饲养标准所规定的数量,这样的设计步骤称为日粮配合。但在实际运用中是按日粮的饲料百分比配制出大量混合饲料,即按生产目的相同的动物群体配制大批混合饲料,这样的饲料称为饲粮。 在畜牧业及实验动物行业,习惯上将动物所用的饲粮称为配合饲料,即指根据动物的饲养标准及所采用的每一种饲料原料的营养素含量,经科学的计算确定出各种原料的的配合比例,然后按这种比例关系经一定的生产流程而规模化生产出来的饲料。 一、配合饲料的种类 根据不同的分类方法可将配合饲料区分如下: 1.按配合饲料的营养成分和对动物的饲喂制度进行分类 ①全价配合饲料 又叫全日粮配合饲料,该饲料含有的各种营养物质和能量均衡,能够完全满足动物的各种营养需要,不需添加任何其他成分就可以直接饲喂,并能获得的经济效益。目前,大鼠、小鼠、家兔和豚鼠都采用全价配合饲料。 ②混合饲料 又叫基础饲料,是由能量饲料、蛋白质饲料等按一定的比例组成,它基本上可满足动物需要,但营养不全面,还需另外添加一定量的青、粗饲料,部分中小单位用于饲养家兔、豚鼠等动物。 ③代乳饲料 也叫人工乳,专门为各种哺乳期动物配制,可代替自然乳的全价配合饲料,如一些剖腹产动物可用其代替保姆动物。 2.按配合饲料的组分精细程度分类 ①天然原料日粮 用经过适当机械加工的谷物、牧草等原料和适当的添加剂配制成的日粮或全价配合饲料。在正常情况下,繁育生产实验动物都是使用这种饲料。 ②提纯日粮 原料经精炼后配制的饲料,如用酪蛋白做蛋白质的来源,糖或淀粉做碳水化合物的来源,植物或动物油做脂肪来源,纤维素做粗纤维的来源,再加上化学纯的无机盐和维生素制备的日粮,这类饲料只用于某种动物实验。 ③化学成分确切的日粮 采用化学上纯净的化合物如氨基酸、糖、三酸甘油、必需脂肪酸、无机盐和维生素制备的日粮。这类饲料只适于有特殊营养素限定的实验使用。 3.按饲料加工的物理性状分类 ①粉状饲料 是把所有的原料按需要粉碎成大小均匀的颗粒再按比例混合好一种料型,这种饲料加工方法简单、成本低,但易引起动物挑食造成浪费,同时饲养效果。 ②颗粒饲料 是以粉料为基础,经过加压成型处理的块状饲料。这种料密度大、体积小、适口性好,具有增加动物的采食量、饲料报酬高的优点。由于加温加压能破坏饲料中的部分有毒成分(如大豆中的抗胰蛋白酶),但同时也使的一部分维生素和酶类受到破坏,在实际使用中应注意适量添加维生素。 ③膨化饲料 是在高温高压下湿粉通过模孔而形成,这种料对非人灵长类、狗、猫等动物的适口性好,其他动物不宜使用。 ④烘烤料 在其他方法不利实行灭菌或成型时,使用烘烤的方法烘制块料并起到一定的消灭微生物的作用。 4.按所适用的动物分类 ①按适用的动物不同,可分为大鼠料、小鼠料、豚鼠料、兔料等。 ②按动物不同生理时期分为繁殖料、生产料、维持料。 ③按不同的饲养目的分类,如正常动物饲料、为某种动物模型所特制的饲料,不同微生物级别的普通饲料、Co60照射灭菌饲料、无菌饲料等。 二、饲料配方的设计 饲料配方是根据动物的营养需要,饲料的营养价值、原料的状况及价格等条件合理地确定各种饲料的配合比例。 1.设计饲料配方所需资料 ①动物的饲养标准或饲料营养标准,可依据有关的全价营养饲料标准。 ②饲料成分及营养价值表和饲料种类、来源及价格。有条件的单位应对每批购入的饲料进行营养物质含量监测分析,或依据当地饲料管理部门提供的饲料成分分析值。 ③所要配合的日粮类型及动物的预期采食量。 2.设计饲料配方的原则 ①选用合适的饲养标准 实验动物的饲料标准并不象家畜家禽那样,规定的详细具体,应根据当地的气候条件等因素具体分析调整。 ②选用适宜的原料 设计各种动物的饲料配方不仅要考虑到动物的营养需要,还要考虑到所用原料的品质、体积、适口性及来源等因素,做到切实可行。 ③要注意到经济效益 在选择原料时尽量利用当地来源丰富的原料品种,并应注意到单个品种的价格因素。 3.全价配合饲料配方的计算方法 饲料配方计算技术是近代应用数学和动物营养学及饲料科学相结合的产物。它是实现饲料合理搭配,获得高效益、低成本饲料配方的根本手段。 常规的计算方法以适于手工计算的试法为主。近年来在有条件的单位,采用解线性规划问题的方法,用计算机来设计既能满足营养需要又能保证成本的饲料配方,已经取得成功并正在推广普及。 不管用什么方法来设计饲料配方,其饲料原料的配合比例只是一种以饲料成分为基础的理论数据,还必须要经过实验室检测和饲养实验来验证。对于实验动物饲料,经过验证的饲料配方,要保持长期稳定。 第五节 实验动物饲料的加工及质量控制 目前,我国实验动物饲料的化生产和商品化供应处于刚刚起步阶段,在大部分地区仍以自产自用为主,由于设备条件和生产规模的限制,在饲料质量的控制方面还无法达到标准化管理的要求,随着实验动物标准化管理的加强,实验动物饲料的质量控制也正逐步纳入科学管理的轨道。 一、实验动物饲料加工生产 实验动物饲料的种类多、所采用的加工工艺也不尽相同,每道工序的设备选择、作管理等都会对饲料质量有显著的影响,所以在整个生产过程均应按工艺标准严格控制。 一般来讲,饲料加工的工序主要有原料的粉碎、配合、搅拌混匀、压制成型、分装等过程。 1. 原料的粉碎 用于加工配合饲料的各种原料,必须首先按照质量标准检查有无霉变,进行除杂工作,然后按要求进行粉碎;粉碎后的饲料要妥善保存,防止受潮。 2. 饲料配合 按配方要求将各种原料进行计量,依次投入混料箱内称之配合。饲料的配合过程要注意计量的准确和防止少投误投。 3. 饲料的混合 将配合好的饲料,在混料箱内经一定时间的搅拌过程,使各种原料均匀地分布。混合过程是饲料加工过程中保证质量的核心环节,混合均匀度是饲料质量检定的重要指标。影响混合均匀度的因素很多,一般要充分考虑设备的性能、原料的比重、体积、搅拌的时间等因素,对于用量较少的原料应采用逐级稀释的方法进行混合。 4. 成型 成型是将混合好的饲料粉料按不同的要求制成不同剂型的颗粒。加工过程中既要严格控制适当的温度尽量避免营养成分的破坏,又要保证适当的硬度和适口性。颗粒的大小因动物的不同而异,一般大鼠、小鼠饲料直径10~12mm,家兔、豚鼠料直径4~5mm为宜。 5. 成品分装 加工好的成品饲料应经过烘烤或其他方法将含水量降低到10% 以下再按需要进行分装。一般普通动物饲料可用塑料桶密封,每桶25公斤左右;用于饲养无菌动物和SPF 动物的饲料可用塑料袋密封真装。 二、饲料的消毒 对于加工后的饲料要经过消毒方可使之符合某一微生物控制级别的实验动物需要。用于饲料消毒的常用方法有干热、湿热、辐照及物熏蒸等多种,应按饲养动物的不同要求和饲林类以及所具备的条件来选择。 1. 干热消毒 使饲料在80~100℃的条件下烘烤3~4小时。此方法设备较简单,但温度不易掌握,灭菌不,尤其是对饲料中营养成分的破坏较大。 实验证明,若温度超过80℃,绝大多数维生素,尤其是维生素C、B1、B6、A就会受到破坏。因此在实践中多采用80℃的烘烤温度,增加烘烤时间的方法。 2. 高温高压灭菌法 在121℃,1.0Kg/cm2的高湿高压下加热15分钟以上,从而达到灭菌的目的。此种方法对于绝大多数维生素的破坏,且有使饲料蛋白质凝固变性的缺点,对动物 适口性,采食量也会降低。 3. 物熏蒸灭菌法 利用化学品的汽雾剂对饲料进行消毒。如用进行灭菌,实验证明,即使熏蒸后将残余气体充分挥发,饲料中也还会残存一些对动物有害的化合物。 4. 射线照射灭菌法 通常在对谷物类饲料灭菌时采用5M rad的60Co照射,此方法对饲料的营养成分破坏最小。实验证明γ射线对于维生素B1和B6和维生素A微小的破坏,对纯化学饲料则损失较大,应将剂量降至3~5M rad。一般建议,SPF动物用饲料,可通过3 Mrad照射,无菌动物用可5M rad照射。 三、饲料质量管理的内容 饲料由配方设计,经原料选择到加工、贮运和全过程都属质量管理的范畴。 1. 配方的选择 在饲料生产之前,应按不同需要对所设计的饲料配方进行饲养实验,经实验验证确 实可行后,方可用于饲养实践,且确定后不能轻易改动。 2. 原料管理 实验动物饲料所用的原料不仅要确保按饲料配方的要求确保各种营养物质的含量, 而且还应根据价格、污染物的含量等因素进行选择,若条件允许应尽可能固定原料产地、 收割季节、加工贮存方法等条件。 3. 生产设施的管理 按《实验动物管理条例》规定,各地实验动物管理机构应对实验动物饲料生产部门 环境条件、设备、工艺、人员结构、监测设施和规章制度等按有关规定进行检查验收, 合格者方可取得生产许可。 4. 贮运管理 实验动物饲料所用的原料、半成品、成品在贮存和运输过程中都要防止霉变;防止 野鼠、昆虫和有毒有害物质的污染;分类存放,标志清楚、明显,严防原料或成品料混 杂。 四、饲料的质量检测 饲料的检测是实验动物饲料质量管理必不可少的一个重要环节和手段。要定期对产 品和原料进行抽样,通过外观、营养成分和有毒有害物质含量的分析、检测,对饲料的 品质进行评定。 1. 感观检验 对饲料的色泽、气味、杂质情况等指标对饲料的新鲜度、均匀度、含水量进行直观 判断。 2. 营养成分测定 按照实验动物饲料营养标准所规定的养分含量及分析方法对产品的营养成分和 混合均匀度进行检测。 3. 饲料卫生指标的测定 应定期对饲料产品的原料按标准限定的有毒有害物质含量和检测方法进行检测。

③每分钟统计一次光明处和阴暗处的鼠妇数目,共统计8次。

来源网络,仅供参考,望采纳,谢谢。

做实验的老鼠有没有毒

症状: 呼吸加快,鼻镜干燥,流泪,流清鼻涕。

一般实验室内饲养的小白鼠是无菌动物。如果要饲养,到兽医院买一瓶消毒液,帮它进行Ⅲ.制定:表面皮肤的清洁,再把它放到通风的笼子里喂养。

海狸鼠养殖方法

②鼠妇放入实验装置,两侧的放同样数目的鼠气候突变受寒引起。妇,静置8分钟。

海狸鼠成年体重6千克左右,仔鼠6~7月龄即可进行交配,年可产2~3胎,一胎产4~6只。海狸鼠以植物根、茎、叶为主要饲料,对饲养条件要求不高。人工饲养海狸鼠,饲料来源广,管理较粗放。

2.搞好繁殖配种繁殖用的海狸鼠应从9~48月龄的成年鼠中挑选。仔鼠6~7月龄性成熟,但以9月龄以上的公母鼠进行交配为好。配种繁殖不受季节限制,配种为自然本交。成年母鼠每隔25~30天出现一次,只有时才能配种,如没有受孕,20天后再时进行补配。母鼠产后2~3天也可配种,即血配,有助于提高受胎率。母鼠时表现愿接近公鼠,常在窝外徘徊鸣叫;公鼠时表现焦躁不安,常爬圈舍,有时跨越圈栏跑

养老鼠会得鼠疫么...怎样养小白鼠啊...怎样养它不会生病呢,,,

Ⅵ.得出结论:

去医学院的买,那里都是饲养在无菌屏障下的小白鼠,不允许感染任何疾病的。

只要注意卫生,不会生病,也不会有鼠疫,可以买一个通风的鼠笼,专门的鼠粮大概4块钱一斤。

定期检查身体,注意不要种公鼠种公鼠要求发育良好,体重1.3kg 以上。背平直,健壮,显著,旺盛,耐粗饲,不打斗。交配动作快,品质优良。和不干净的东西接触

为什么在实验室做实验要用小白鼠????

1.建好圈舍海狸鼠的饲养设备用砖和石棉瓦搭建而成。一般采用圈舍饲养法,圈舍的搭建形式与猪圈不多,只是比猪的圈舍略小而已。要有一个露天运动场,面积大小按每只1平方米设计,在其一端修建一个窝室,每只约占0.5平方米,运动场的另一端修建水池,供饮水和游泳用,池的面积有运动场的一半大即可。整个圈舍的周围修筑高80厘米以上的围墙,每圈饲养2只种鼠。

因为实验室用的小白鼠都是在无菌状态没有毒。下养殖的,适合做实验

小白鼠比较健康吧,可排除一些因素

洗澡时要不要把热水器插头拔掉?老师傅:不要拿生命开玩笑!

影响鼠妇分布的环境因素的实验数据

⒊实验装置

探究实验:光对鼠妇生活的影响

医院科研用的小白鼠多是个人购买的,由于购买渠道的关系,不敢保证有没有病菌。如果一定要养,建议不要直接接触到小白鼠,包括它的物,毕竟小白鼠身上有很多细菌嘛,有时细菌对小白鼠来说是正常菌群。对人就不一定了,你只要不接触就没事的。如果不小心被小白鼠咬伤出血,建议尽快接种狂犬。但是个人建议,还是不要在家中饲养。

Ⅰ.提出问题:

光对鼠妇的生活有影响吗?

Ⅱ. 作出假设:

鼠妇适于生活在阴暗的环境中,光对鼠妇的生活有影响。

⒈材料用具

①10只鼠妇 ②纸盒 ③湿土 ④手表 ⑤纸板 ⑥玻璃板⒉实验变量

环境:阴暗与明亮两种环境

①在纸盒内放上一层湿土。

②以横轴中线为界,一侧盖上纸板,另一侧盖上玻璃板。

⒋实验步骤

①准备好材料用具,并确定地点及时间。

Ⅳ.实施:

按照上述实验步骤做实验,数据于下表。

鼠妇喜欢在阴暗的环境中生活,不喜欢明亮,所以,光会影响鼠妇的生活。

光和水,环境中的水分多使泥土过度湿润,水分少泥土太干燥,鼠妇喜欢水分中等的泥土生存。另外,鼠妇适于生活在阴暗的环境中,光会影响鼠妇的生活。

有个问题 能不能把准确的得数说出来 ,我没法做实验啊。

阴暗10分钟各 几只鼠妇?

拜托啦!!!!!!!!!!!!!!

先找鼠妇,在比较(按书上的方法去做)

仓鼠养殖经验

明亮10分钟各 几只鼠妇?

平6. 小鼠受精卵原核注射sgRNA/Cas9 mRNA和打靶载体;时,要经常更换木屑,要给鼠宝宝买几个磨牙粮,不然的话他没出磨牙,就会啃笼子,会中毒的.一块磨牙量很便宜,3-5元左右,可以使一个月呢.食物就给它买专门的

鼠粮

,切忌,千万别自己喂小米或瓜子.因为你不能保证卫生.

基因敲除小鼠制备的流程

5. 将胚胎干细胞阳性克隆注射到小鼠囊胚中,并植入到假孕小鼠的内;

基因敲除小鼠已经成为现代生命科学基础研究和物研发领域不可或缺的实验动物模型,在生命科学、人类和健康研究领域中发挥着重要的作用。基于胚胎干细胞的基因打靶技术、EGE技术(基于Crispr cas9技术)是当下比较火热的基因敲除小鼠制备技术。利用这两种技术制备基因敲除小鼠的流程是什么样的?

一、 基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠的流程:

1. 课题设计,订购课题BAC菌;

2. 按照课题设计,完成打靶载体设计和构建;

3. 将重组载体电转到胚胎干细胞中,用G418筛选转染后的胚胎干细胞,得到阳性克隆;

4. 进一步通过PCR和southern blot杂交技术(基因敲除小鼠检测金标准)对上一步得到的阳性克隆进行筛选,得到稳定整合外源基因的胚胎干细胞阳性克隆;

6. 得到嵌合鼠,并获得F1阳性杂合子小鼠。

二、 利用EGE技术(基于Crispr cas9技术)制备基因敲除小鼠的流程

1. 设计构建识别靶序列的sgRNA;

2. 设计构建致靶基因切割的EGE系统载体质粒;

3. 利用百奥赛图自主开发的UCA试剂盒对sgRNA/Cas9进行活性检测;

4. 设计构建打靶载体;

5. 体外转录sgRNA/种母鼠种母鼠要求产仔率高,母性强,采食力强,体重1.2kg 以上。Cas9 mRNA;

7. 获得Fo代小鼠,利用PCR对Fo代小鼠进行基因型鉴定;

8. 获得F1代小鼠,利用PCR和southern blot杂交技术(基因敲除小鼠检测金标准)对F1代小鼠进行基因型鉴定。

虽然EGE技术(基于Crispr cas9技术)制备基因敲除小鼠看似比基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠流程繁琐,其实不然,EGE技术(基于Crispr cas9技术)系统构建简单,基因敲除/敲入效率高,速度快,可实现多基因、多物种基因敲除/敲入,最快2个月即可得到F0代阳性鼠,5个月得到F1F1代杂合子小鼠。